pBR322 là một plasmid được sử dụng như một vector tạo dòng sử dụng vi khuẩn E. coli. Được tạo ra vào năm 1977 trong phòng thí nghiệm của Herbert Boyer tại trường Đại học California, San Francisco, được đặt tên bởi nhà nghiên cứu đã tạo ra nó. Chữ “p” đầu tên nghĩa là "plasmid," và “BR” là tên viết tắt của "Bolivar" và "Rodriguez".pBR322 là 4361 cặp base được lặp lại từ nguyên mẫu plasmid pMB1, có quan hệ mật thiết với plasmid ColE1. pBR322 mang gen ampR: mã hóa protein kháng ampicillin (gốc plasmid RSF2124), gen tetR: mã hóa protein kháng tetracycline (gốc plasmid pSC101), và gen rop: điều hòa sự sao chép plasmid. Plasmid này có những điểm cắt giới hạn bởi hơn 40 enzyme cắt giới hạn. 11 trong số 40 đoạn đó nằm trong gen tetR. Có 2 đoạn bị cắt giới hạn bởi enzyme HindIII và CiaI trong promoter của gen tetR. Có 6 điểm cắt giới hạn nằm trên gen ampR.[1]Trình tự cắt giới hạn của plasmid được đánh số từ 0 tại điểm cắt giới hạn của EcoRI, đếm dần đến gen tet. Gen kháng ampicillin là penicillin beta-lactamase. Promoters P1 và P3 là promoter của gen beta-lactamase. P3 là promoter tự nhiên, còn P1 là nhân tạo được nối lại từ những đoạn từ hai AND khác nhau của gen pBR322. P2 nằm chung với P1, nhưng đứng đối diện nhau trên plasmid và là vùng khởi đầu phiên mã gen kháng tetracycline.[2]