Danh sách 100 anh hùng và kẻ phản diện của Viện phim Mỹ (tiếng Anh: AFI's 100 Years...100 Heroes and Villains) là một trong các danh sách được Viện phim Mỹ (American Film Institute, viết tắt là AFI) lập ra nhân dịp kỉ niệm 100 năm ngày ra đời của nghệ thuật điện ảnh. Danh sách này bao gồm 100 nhân vật, gồm các vai anh hùng và vai phản diện, được coi là nổi bật và đáng nhớ nhất của điện ảnh Mỹ, nó được công bố tháng 6 năm 2003.